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猪ELISA试剂盒的操作步骤
点击次数:324 发布时间:2018-07-26
   猪ELISA试剂盒的操作步骤
   猪ELISA试剂盒法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断,已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点&。
   猪ELISA试剂盒不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查&。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法&。
   猪ELISA试剂盒操作步骤: 
    1. 使用前,将所有试剂充分混匀&。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差&。 
    2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数&。每个标准品和空白孔建议做复孔&。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔&。 
    3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内&。立即加入50ul的生物素标记的抗体&。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟&。 
    4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干&。重复此操作4次&。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次&。 
    5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟&。 
    6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干&。重复此操作4次&。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次&。 
    7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟&。避免光照&。 
    8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果&。 
    9. 在450nm波长处测定各孔的OD值&。 
    猪ELISA试剂盒结果判断与分析: 
    1、 仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值&。 
    2、 以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的DPD标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的DPD含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度&。 
 
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